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经验分享:植物组织培养实验

发布者: 静待花开 | 发布时间: 2019-5-15 15:13| 查看数: 1| 评论数: 0 |帖子模式 |只看大图 |关灯


  植物组织培养是高中生物新课标实验中的重要实验,通过组培,能提高学生实践动手能力科学实验能力技术推广能力等,也是学生最想动手操作的一个实验。但许多老师和同学在组培实验操作过程中因为一些细节问题的疏忽,最终导致实验未能成功。下面为大家总结组培过程中的注意事项,以助老师一臂之力  绿植租摆



          1 培养基的配制


          植物组织培养最常用的培养基为MS培养基,其中包含几十种化合物,在配制培养基时切忌“一锅煮”,就是不能将各种化合物一齐添加进去,因为有些化合物相遇会发生化学反应产生沉淀,影响培养基的营养成分,因此,一定要等到一种成分溶解之后,再缓慢的添加另一种成分,使其成为均一无沉淀的培养基。


          另外,培养基的H值会对培养基的硬度造成影响。若将培养基的H调的过高,则会使培养基变硬,进而增加了接种的阻力,从而对外植体造成损伤。若将培养基的H值调的过低,则会使培养基不能凝固,起不到固定外植体的作用。因此,将培养基的H调节至6即可。


          中学开展实验教学由于学生人数多,课时紧张,如果教师还沿用传统的培养基配制方式,将无形中增加许多工作量。为减轻教师准备实验的工作压力,川布兰生物特自主研发适合中学实验教学的植物组织培养试剂盒。该试剂盒中涵盖了配制培养基所用到的所有材料,包括MS培养基激素NOH溶液及PH试纸。传统配制3L培养基大概需要一天的时间,而使用试剂盒最多仅两个小时,大大提高了实验准备的工作效率。传统配制方法需要配制MS培养基成分的母液,而母液保存时间短,当母液底部出现沉淀时将无法使用。采用试剂盒,极大的节省试剂,从而节省教学成本。


          
       
               
       
       
                  2 外植体的选择
       
       
                  为了使接种后的诱导得以成功,选择的外植体应该是幼嫩的处于生长旺盛时期的。而且选择的外植体的体积不能过小,如若过小则会影响愈伤组织的形成,从而影响进一步的分化。因此,一般接种的外植体体积在5~12的范围内即可。
       
       
                  3 消毒
       
       
                  外植体的消毒主要分为两个阶段。首先是初次消毒,先用流水冲洗,然后用洗衣粉水进行刷洗,以去除表面的污垢,最后用流水冲洗2,完成第一次的消毒。接下来的消毒步骤要在超净工作台中进行,在各种消毒剂中升汞的杀菌效果最好,但由于其中含有重金属,且实验后的收集工作不易,因此在中学实验中不推荐使用升汞。采用酒精消毒3,2%~1%的次氯酸钠消毒8~1即可达到同样的消毒效果。
       
       
                  4 接种
       
       
                  首先,点燃酒精灯,用酒精棉球擦拭双手,再擦拭实验用到的器械,然后在火焰上反复灼烧,放置一旁待到器械温度不高时方可用其进行操作,以免将外植体烫伤。操作过程中,避免双手在培养皿上方来回通过造成外植体的污染,可以在每次修剪完外植体后将培养皿的盖子盖上,以降低污染率。接种前,要将培养基的瓶盖在火焰上迅速灼烧(由于目前大部分学校都在使用塑料组培瓶,因此一定要迅速通过火焰,以防损坏组培瓶),方可进行接种。
       
       
                  5 培养
       
       
                  接种好的培养瓶放置于光照培养架上,每天给予1的光照即可满足外植体分化对光照的需求。
       
       
                  
               
                       
               
               
6 炼苗与移栽
               
               
待到无菌苗长至组培瓶的瓶口时即可进行移栽,如若不移栽,则会影响植株的进一步生长,最终导致植株的死亡。移栽之前,首先要对组培苗进行炼苗,具体做法为先闭瓶锻炼3,再开瓶锻炼3,以培养基上开始长菌为移栽的标准。
               
               
移栽前,一定要将根部的培养基洗净,如若没有洗净,在种植于土壤中时,培养基的营养成分会加剧土壤微生物的生长,降低组培苗的移栽成活率。为了提高组培苗的成活率,可先在灭过菌的珍珠岩或蛭石上培养使根系发达再转移到土壤中。
               
               
植物组织培养并不像您想象中的那么困难,只要在整个操作过程中注意到每个细节,一定会收获到成功的喜悦!
               
               

                       

                       
                       
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