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郑州唯尔-植物组织样本的前处理

发布者: 寻找答案 | 发布时间: 2019-5-15 14:50| 查看数: 1| 评论数: 0 |帖子模式 |只看大图 |关灯


  一匀浆介质  植物租摆



          一般采用5 L T-HC, H 74 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定指标的情况自行设定浓度,目的是保持样本的等渗环境。


          二组织匀浆的制备


          1取组织块(2~5)最少可到5~1在冰冷的PBS中漂洗,滤纸拭干,准确称重,放入5的匀浆管中。


          2按重量():体积()=1:4的比例加入4倍体积的匀浆介质于匀浆管中,冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块。


          3匀浆的方式手工匀浆,机器匀浆。


          ① 手工匀浆左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(6~8分钟),充分研碎,制成2%的匀浆液。


          ② 机器匀浆用组织捣碎机1~15 转分 上下研磨制成2%组织匀浆,也可用内切式组织匀浆机制备(匀浆时间1秒次,间隙3秒,连续3~5次,在冰水中进行,可适当延长匀浆时间),


          镜检观察:取少量组织匀浆作涂片(直接涂片染色均可以),显微镜下观察细胞是否破碎,若没有则可延长匀浆时间。


          4将制备好的2%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机4转分左右,离心1~15分钟,取上清液进行测定


          三样本保存:


          植物组织样本暂时不测定,可立即低温冻存,温度越低越好,中间如不反复冻融,-2℃以下可保存三个月,-7℃以下可保存六个月。


          制备好的匀浆液建议不要冻存,最好当天进行测定,如放置时间过长相关酶活会有所下降,部分指标4℃可存放3~5天(如SOD要存放2~3天,MDA可存放3~5,总蛋白测定可存5~7天等)

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